膳食纤维的标准测定方法

一、实验原理

  膳食纤维又称为植物细胞壁，它包括纤维素、半纤维素、木质素、果胶、角质和二氧化硅等。本实验用中性洗涤纤维测定法测定，该法所测的膳食纤维为不被人消化系统中的酶所消化，也不被中性洗涤剂溶解的组分。其原理是样品经热的中性洗涤剂浸煮后，残渣用热的蒸馏水充分洗涤，除去样品中游离淀粉、蛋白质、矿物质，然后加入α淀粉酶溶液以水解结合态的淀粉，再用蒸馏水，丙酮依次洗涤，以除去残存的脂肪、色素等，残渣经烘干，即为不溶性膳食纤维。

二、实验用品

（一）器材

 （1）电热恒温干燥箱。

 （2）恒温箱。

 （3）可调温的电炉或可控温的电热板。

 （4）抽滤装置（包括抽滤瓶及水泵或真空泵）。

 （5）干燥器（用无水氯化钙或变色硅胶为干燥剂）。

 （6）高型烧杯（容量600ml）。

 （7）坩埚式耐热玻璃滤器（容量为60ml，孔径40~60µm；相当于250目~400目）。

 （8）耐热玻璃棉。

（二）试剂

 （1）石油醚（沸点范围35~60℃）。

 （2）中性洗涤剂溶液

    18.61g乙二胺四乙酸二钠和6.81g四硼酸钠（Na₂B₄O₇^.10H₂O）用250ml蒸馏水加热溶解；

    30g十二烷基硫酸钠和10ml（2-ethoxy-ethanol）溶于200ml热蒸馏水中；

    4.56g Na₂HPO₄溶于150ml蒸馏水，将‚和ƒ3种溶液合并。然后用磷酸调节混合液pH至 6.9~7.1，后加蒸馏水至1000ml，即为中性洗涤溶液。此溶液使用期间如有沉淀生成，需在使用前加热到60℃，使沉淀溶解。

 （3）十氢萘。

 （4）α淀粉酶溶液：取0.1mol/LNa₂HPO₄溶液610ml和0.1mol/L Na₂HPO₄溶液390ml混匀，配

       成pH7.0的磷酸盐缓冲液。用此缓冲溶液配2.5%酶溶液，离心或过滤，取清液备用。

（5）丙酮。

（6）无水亚硫酸钠。

（三）材料

     小麦麸皮。

三、实验程序

   1、样品处理

      将烘干样品磨细过20~30筛。准确称取0.500~1.000g置于高型烧杯中。

   2. 加试剂

     依次加入以下试剂于高型烧杯中：

     中性洗涤剂溶液100ml（室温）

     十氢萘2ml(样品煮沸时如产生的泡沫不多，则可不加此试剂)。

     无水亚硫酸钠0.5g。

3.热处理

 将上述烧杯置于电炉上加热，使杯内溶液在5~10min内煮沸，自沸腾计时，维持微沸60min。

4.洗涤

      将烧杯内的内容物移入已称重之耐热玻璃滤器（内铺有耐热玻璃棉，并已于110℃烤箱烘至恒重） 内，抽滤至干，再加入热蒸馏水（100℃）约100ml洗残渣，重复洗3次（用热蒸馏水量约为 300~500ml）。

5.酶处理

       加酶溶液约50ml于滤器中（滤器底部须加塞子，使之不漏溶液），使酶液浸没残渣，并加数滴甲

       苯以防腐，然后于恒温箱37℃放置18h或过夜。

6.洗涤

      取出滤器，除去底部的塞子，抽滤，并用热水约500ml分次洗去酶液。用碘液检查是否有淀粉残留，如淀粉已除尽，则可抽干滤液，然后加丙酮洗残渣，抽干，再以丙酮洗一次。若有淀粉残留，需重复“酶处理”步骤。

7. 将残渣及滤器于烘箱中110℃烘至恒重，每次称重时应先移入干燥器中，冷至室温后称量。

8.结果处理

      按下式计算样品中膳食纤维含量：