凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一 系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程称为有机物的消化。为了加速和*有机物质的分解，缩短消化时间，在 消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、过氧化氢等试剂，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解，除硫酸钾外，也可以加入硫酸钠等盐类 类提高沸点，但效果不如硫酸钾。硫酸铜起催化剂的作用。凯氏定氮法中可用的催化剂种类很多，除硫酸铜外，还有汞、硒粉、钼酸钠等，但考虑到效果、 价格及环境污染等多种因素，应用非常广泛的是硫酸铜。使用时常加入少量过氧化氢等作为氧化剂以加速有机物氧化。消化完成后，将消化液转入凯氏定氮 仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内，硼酸接受氨后，形成四硼酸铵，然后用标准盐酸滴 定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-次甲 基蓝混合指示剂颜色变化来判定。测定出的含氮量是样品的总氮量，其中包括有机氮和无机氮。
以蛋白质为例，反应式如下：
消化：蛋白质 + H2SO4→(NH4)2SO4
+ SO2↑+ CO2 ↑+ H2O
蒸馏：(NH4)2SO4 + 2NaOH→ Na2SO4
+ 2 H2O + 2NH3 ↑
2NH3 + 4H3BO3→(NH4)2B4O7
+ 5H2O
滴定：(NH4)2B4O7
+ 2HCl + 5H2O→2NH4Cl + 4 H3BO3
蛋白质是一类复杂的含氮化合物，每种蛋白质都有其恒定的含氮量[约在14%~18%，平均为16%(质量分数)]。凯氏定氮法测定出的含氮量，再乘以系数6.25，即为蛋白质含量。
本法适用于测定0.2～1.0mg氮的样品测定。
通过本实验使学生能理解凯氏定氮法的原理，掌握凯氏定氮法的操作方法。
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