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冷冻保藏法保存微生物菌种时需注意几个要点

更新时间:2023-04-24 点击次数:808

冷冻保藏法适用于抗冻力强的微生物。这些微生物可在其菌体细胞外遭受冻结的情况下而不受损伤,而对其它大多数微生物而言,无论在细胞外冻结还是在细胞内冻结,都会对菌体造成损伤,当采用这种保藏方法时,应注意以下几点:
1、原则上应尽快进行冷冻处理,但当加入保护剂时,可静置一段时间后再进行处理。


2、就动物细胞而言,应在-20℃范围内以1℃/min左右的速度缓慢降温,此后必须尽快降到贮藏温度;而对绝大多数微生物而言,则不必如此,如结构较为复杂的原虫则可在-35℃范围内进行缓慢降温,而噬菌体则必需采用上述的二阶段法进行冷冻。


3、要选择适于冷冻干燥的菌龄细胞。


4、要选择适宜的培养基,因为某些微生物对冷冻的抵抗力,常随培养基成分的变化而显示出巨大差异。


5、要选择合适的菌液浓度,通常菌液浓度越高,生存率越高,保存期也越长。


6、若进行长期保存,则贮藏温度越低越好。


7、取用冷冻保存的菌种时,应采取速融措施,即在35~40℃温水中轻轻振荡使之迅速融解。而就厌氧菌来说,则应选择静置融化的措施。当冷冻菌融化后,应尽量避免再次冷冻,否则菌体的存活率将显著下降。


8、菌液内不添加电解质(如食盐等)。


9、可在菌液内添加甘油等保护剂,以防止在冷冻过程中出现菌体大量死亡的现象。同样,也可添加各种糖类、去纤维血液和脱脂牛乳等具有良好保护效果的溶剂,但对有些微生物而言,不加保护剂时更有效。



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